zabika.ru 1 2

Методики экспертного исследования апрофена и тарена.

В данной работе предлагается комплексная методика качественного и количественного исследования тарена и апрофена в составе тарена. Приведены материалы ИК, УФ и масс-спектров, а также газовых и жидкостных хроматограмм.


APROPHEN; DIETHYLAMINOETHYL DIPHENYLPROPIONATE.
Входит в состав препарата – ТАРЕН.

Состав на одну таблетку:
апрофена-0,025 г, вспомогательных веществ- 0,075 г. Апрофен является основной составной частью таблеток «Тарен» (состав на одну таблетку: апрофен – 0,0225 г, циклозил – 0,0015 г, хлорозил – 0,00075 г, карбахолин – 0,000125 г, глюкоза – 0,12 г, крахмал, тальк, стеарат кальция – до 0,2 г).

В последнее время отмечается значительный рост случаев немедицинского злоупотребления данного препарата.

Использование тестов «Наркоспектр»:

Для отнесения подозреваемого объекта к апрофену проводят последовательно испытания реагентами тестов Ф8, Ф16, Ф14, Ф11. При взаимодействии с реагентами теста Ф16 порция объекта составляет около двух спичечных головок, в остальных случаях - около одной спичечной головки.

В присутствии апрофена в объекте тест дает голубую окраску нижнего (хлороформного) слоя реакционной смеси, Ф8 и Ф14 - желто-зеленую окраску реакционной смеси, Ф11 - желтозеленую, переходящую в оливковую в течение 0,5-1 минуты.


  1. Исследование методом газовой хроматографии с ПИД.

Исследование методом газовой хроматографии используют для качественного выявления и количественного определения психотропного вещества – апрофена в составе представленных на экспертизу веществ и таблеток.

При качественном анализе используют органические экстракты исследуемых объектов (в метаноле или в хлороформе). Исследование проводят на газовом хроматографе фирмы “Хьюлетт-Паккард” модели 5890 серии II, на капиллярной кварцевой колонке HP-1 (25 м х 0,2 мм, тол­щина пленки фазы- 0,33 мкм). Условия анализа: температура инжектора - 280оС, температура детектора - 290оС, температура колонки изменялась от 200оС до 280оС, со скоростью 10оС/мин. Газ-носитель - водород, детектор пламенно-ионизационный. Объём вводимой пробы 1 мкл. Пробы вводили в хроматограф в режиме с делением потока 1:40.


При количественном анализе объекта, содержащем психотропное вещество – апрофен берут точную навеску вещества или таблетки, массой 4-6 мг, добавляют 1 мл раствора метилстеарата в хлороформе с концентрацией 1 мг/мл и 1 каплю диэтиламина, интенсивно встряхивают, отстаивают и исследуют в указанных выше условиях. Времена удерживания составляют: для метилстеарата – 2,41 мин, для апрофена – 2,9 мин. Анализ проводят не менее трех раз. Затем, по результатам параллельных анализов, для объекта определяют среднее значение массовой доли апрофена (Х, %масс) и рассчитывают доверительный интервал.

В этом случае расчет количественного содержания апрофена проводят по формуле:

%, где:

Sx – площадь пика апрофена;

Sст – площадь пика внутреннего стандарта;

mст – масса внутреннего стандарта, мг;

mпмасса исходной пробы, мг;

K – соответствующий относительный массовый коэффициент.

Относительный массовый коэффициент апрофена к метилстеарату равен 0,83.

Также возможно количественное определение апрофена по построенной калибровке с использованием внутреннего стандарта. Для построения калибровки используют либо чистый апрофен, либо таблетку тарена с известным содержанием апрофена в ней. По оси абсцисс откладывают концентрации, по оси ординат – отношение площади пика апрофена к площади пика метилстеарата. Используют как минимум три калибровочных раствора с концентрациями апрофена от 1 до 5 мг/мл (мг вещества в растворе метилстеарата в хлороформе с концентрацией 1 мг/мл). Далее по калибровочной зависимости, зная отношение площади пика апрофена к площади пика метилстеарата для вещества или таблетки с неизвестным содержанием апрофена, определяют концентрацию вещества в растворе, и рассчитывают содержание вещества в таблетке или в веществе, представленном на экспертизу.


  1. Исследование методом газовой хроматографии с МСД.


Подготовку пробы проводили следующим образом:

От исследуемого вещества отбирают навеску массой 0,01 г. Навеску заливают 0,4 мл дистиллированной воды, затем добавляют к полученной смеси 0,8 мл хлороформа и 0,2-0,5 мл 25% раствора аммиака. Смесь встряхивают, после полного расслоения отбирают хлороформный слой.

Полученный хлороформный экстракт анализируют на газовом хроматографе «Agilent Technologies» 6890N с масс-селективным детектором «Agilent 5973 N» в следующих условиях:

  • кварцевая капиллярная колонка HP-5MS – 30 м;

  • начальная температура термостата колонки – 150 0С (выдержка 3мин.);

- скорость нагрева до температуры 280 0С - 30 0С/мин (выдержка 20 мин.);

  • температура инжектора – 250 0С;

  • деление потока в инжекторе – 40:1;

  • температура интерфейса – 280 0С;

  • газ носитель гелий – 1,0 мл/мин;

  • объем пробы, мкл. – 1,0.

На хроматограмме представленного объекта наблюдают пик апрофена. Типичные хроматограммы и масс-спектр апрофена приведены на рисунках …


  1. Исследование методом высокоэффективной жидкостной хроматографии.


Подготовку пробы проводят следующим образом:

От исследуемого вещества отбирают навеску массой 0,01 г. Навеску заливают 20 мл дистиллированной воды, затем к полученной смеси добавляют две капли концентрированной соляной кислоты. Полученный раствор тщательно перемешивают в ультразвуковой ванне, фильтруют и исследуют на жидкостном хроматографе «Милихром А-02».

Условия анализа:

- колонка размером 2х75 мм с обращенно-фазным сорбентом «ProntoSIL-120-5-C18 AQ);

- элюент А: 4М LiClO4-0,1М HClO4: H2O (5:95);

- элюент В: ацетонитрил;


- градиент: от 5 % В до 100 % В за 40 мин; 100 % В 3 мин;

- поток: 100 мкл/мин;

- объем пробы: 4 мкл;

- температура: 40 0С;

- детектор: 210, 220, 230, 240, 250, 260, 280 и 300 нм.

Идентификацию вещества в полученных растворах осуществляют путем сравнения его хроматографических и спектральных параметров с аттестованными значениями, включенными в базу данных «ВЭЖХ-УФ» (свидетельства об аттестации Госстандарта РФ № 37-03 и № 38-03 от 10.12.2003 года).

Затем определяют концентрацию апрофена в полученном растворе и рассчитывают содержание апрофена в составе таблетки или вещества, представленных на исследование. Содержание вещества рассчитывают по формуле:

C гр х V х 100%

Q = --------------------- , где

g
Q - содержание определяемого вещества, масс. %;

Cгр - концентрация вещества в растворе, найденная по градуировочной кривой, мгмл;

V - объем дистиллированной воды, в котором была растворена навеска образец, мл;

g - навеска исследуемого образца, мг.


  1. Исследование методом ИК-спектрометрии.

Исследование проведено с целью идентификации апрофена и определения наполнителей в составе таблеток. Для этого снимали спектр чистого апрофена и таблетки тарена, прессуя их в таблетки с бромидом калия. Для определения наполнителей осадки от частей представленных таблеток тарена отмывали раздельно этилацетатом и гексаном; метанолом; ацетоном; метанолом и хлороформом. Полученные осадки высушивали и прессовали в таблетки с бромидом калия и исследовали на ИК-Фурье спектрометре модели “Nexus FT-IR” фирмы “Thermo Nicolet”. Спектры регистрировали в режиме “пропускание” в инфракрасной области волновых чисел от 4000 до 400 см -1 при следую­щих условиях детектор DTGS-KBr; разрешение - 4 см -1; скорость вращения зеркала – 0,6329; количество сканирований- 64.


Полученные таким образом спектры, после обработки на программном обеспечении «OMNIC» версии 6.1а. соответствовали спектрам соответственно апрофена, тарена и глюкозы из спектральной базы данных «Hummel Polymer Sample Library». Спектр чистого апрофена приведен на рис …; спектр тарена приведены на рис …; спектры глюкозы (из отмытых осадков) приведены на рис …
5. Исследование методом УФ-спектрофотометрии.

Спектр апрофена в 0,1 н соляной кислоте приведен на рис. № 1.

Спектр апрофена в составе таблеток тарена в 0,1 н соляной кислоте приведен на рис. № 2.

Таблетки «Тарена» поступают на исследование в смеси с различными наполнителями, в качестве которых выступают сахара, крахмал, тальк, стеарат кальция и в смеси с различными добавками, в качестве которых выступают циклозил, хлорозил, карбахолин.

Наличие наполнителей таких, как сахаров, крахмала, талька и стеарата кальция в смеси не мешают определению апрофена методом УФ спектроскопии.

Добавки же, такие как циклозил, хлорозил, карбахолин в кислой среде (рН = 0 - 1) влияют на количественное определение апрофена данным методом.

Поэтому данный метод проименим лишь для веществ, содержащих апрофен и вышеуказанные наполнители.

Количественное определение апрофена методом УФ спектроскопии проводят по методике с использованием градуировочной кривой. Для построения калибровочной кривой готовят стандартный раствор апрофена гидрохлорида, растворяя точную навеску чистого вещества 40-50 мг в 50 мл 0,1 н НСl (8,3 мл HClконц.+991,7 мл H2Oдист., если % содержание кислоты в реагенте равно 37 и удельный вес реагента равен 1,19 г/мл). Из полученного таким образом стандартного раствора готовят путем разбавления не менее 4 растворов с концентрациями в интервале от 0,2 до 0,8 мг/мл. Фотометрирование растворов проводят в кварцевых кюветах толщиной 10 мм относительно 0,1 н НСl, оптическую плотность вычисляют по разности значений оптических плотностей при 258 нм (максимум поглощения) и 300 нм (минимум поглощения). При построении калибровочной кривой по оси абсцисс откладывают значение концентрации (С, мг/мл), а по оси ординат - вычисленную оптическую плотность (А).


С целью определения содержания апрофена гидрохлорида в исследуемом образце навеску 40-60 мг (g) растворяют в 50 мл (V1) 0,1 н соляной кислоты. УФ спектр полученного раствора регистрируют в тех же условиях, что и УФ спектры стандартных образцов. Затем, определив значение оптической плотности для образца, находят концентрацию (Сгр) апрофена гидрохлорида в растворе по калибровочной кривой и рассчитывают содержание вещества по формуле (1):

C гр х V1 х 100%

Q = --------------------- , где

g

Q - содержание определяемого вещества, масс. %;

Cгр - концентрация вещества в растворе, найденная по градуировочной кривой, мгмл;

V1 - объем дистиллированной воды, в котором была растворена навеска образец, мл;

g - навеска исследуемого образца, мг.

Рис № 1.


УФ-спектр апрофена в 0,1 н соляной кислоте.
Рис № 2.


УФ-спектр тарена в 0,1 н соляной кислоте.

.
Типичная хроматограмма апрофена в этилацетате
.




Типичная хроматограмма апрофена.




Типичная хроматограмма тарена.





Типичная хроматограмма тарена в хлороформе.




2500 2000

Wavenumbers(cm-l)

Апрофен








следующая страница >>